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多肽的溶解性

溶解性是使用多肽时比较重要的条件。每个氨基酸都有其固有物理特性。如亮氨酸、异亮氨酸、颉氨酸是疏水性的,其他氨基酸如赖氨酸、组氨酸、精氨酸是亲水性的。因此不同的多肽因其组成不同而具有不同的溶解性。

我公司合成的所有多肽均是以冻干的形式提供给您,请您在使用之前仔细阅读以下说明书,以确保多肽在溶解和保存过程中不影响您的使用:

  1. 如何正确溶解多肽?

  溶解性是使用多肽时比较重要的问题。每个氨基酸都有其固有化学特性。如亮氨酸Leu、异亮氨酸Ile、颉氨酸Val是疏水性的,其他氨基酸如赖氨酸Lys、组氨酸His、精氨酸Arg是亲水性的。因此不同的多肽因其组成不同而具有不同的溶解性。

  备注:在多肽溶解之前,建议您先用少量肽来试验最适溶解方法,只有当多肽完全溶解后,才能加入水或缓冲液将之稀释至最终浓度

  2. 如何溶解易溶性多肽?

  一般情况下,多肽首先选择溶解在灭菌的蒸馏水或去离子水中。

  如果这个肽是不溶于水的,且其是酸性的,加入温和的碱如0.1%NH4OH能够增加肽的溶解度。相反,对于碱性的肽,温和的酸如0.1%的醋酸或TFA(三氟乙酸)能够帮助多肽溶解。

  3. 如何溶解疏水性多肽?

  在一些情况下,某些肽具有很高的疏水性时,不易溶解,可以用少量的DMFDMSO帮助其溶解,这时推荐将多肽溶解于高浓度,然后用水或缓冲液将其稀释到正常的工作浓度。因为盐会导致疏水性多肽的聚合,所以必须在多肽完全溶解后加入缓冲液进一步稀释。当您遇到这种情况时,请您注意以下几点说明:

  a. DMFDMSO的使用有助于多肽的溶解,这是通过破坏多肽的二级结构而助溶。

  b. 这种试剂的使用可能会对其生物活性及后续的研究工作造成干扰,请您在溶解考虑到这个问题。

    4. 如果多肽溶解不好该怎么办?

    对于使用多肽的研究人员来说,多肽的溶解经常是一个主要的难题。每个氨基酸都有不同的物理特性,所以不同的多肽有着不同的溶解性。通常方法,多肽首次须溶解于蒸馏水,更适合消毒水。如果溶解还是有问题,请尝试如下步骤:声波降解有助于溶解多肽。少量醋酸稀释溶液(10%浓度)有助于一般多肽的溶解,氨水溶液有助于酸性多肽的溶解。我们还推荐将多肽溶解于高浓度,然后用水或缓冲液将其稀释到正常的工作浓度,因为盐会导致聚合。(所以必须在多肽完全溶解后加入缓冲液。)

   

    5是否需要在特殊PH值中溶解多肽?

    报告将会指示是否有特殊PH值的要求。 如果有特殊PH值要求,C.O.A报告中会注明。

有些溶解性上写ACN”,是什么意思?

    “ACN”是乙腈,是用来帮助溶解某些肽的。

  多肽溶液可能遇到细菌降解。为避免该现象的发生, 多肽应溶解在无菌的蒸馏水中, 或者用0.450.2μm孔径的滤膜过滤除菌。

  包含CysMetTrp的多肽特别容易氧化, 因此应该溶于无氧的水中。无氧水可以通过注入惰性气体(氮、氦、氩)减压除气得到。

  2. 若多肽不溶于纯水,超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。注意: 超声处理会引起溶液发热和多肽降解。


多肽溶解指南

   合适的溶解方法是多肽实验成功的重要因素。不合适的溶解会造成多肽的损失和实验的失败;然而,寻找理想的溶解方法有时相当有挑战性。

您可以通过本指南中的步骤来选择最佳溶解方法,建议在溶解之前进行小试:通常先用蒸馏水或无菌水进行小试,

长度小于五个氨基酸的寡肽尤其如此。对于其他的特殊多肽,需要根据多肽的序列优化溶解条件。

溶解小试指南:

1. 将多肽序列中的每个酸性氨基酸包括天冬氨酸AspD),谷氨酸GluE)和C端的羧基-COOH赋值为-1;每个碱性氨基酸包括精氨酸ArgR,赖氨酸LysK),组氨酸HisH)和N端的氨基-NH2赋值为+1;中性氨基酸为0。以此为基础计算整条多肽的值,得分为正的称为碱性多肽,得分为负的称为酸性多肽,得分为零的称为中性多肽。

2. 如果是碱性多肽,先尝试用水溶解;如果不能溶解,尝试使用10% - 30%的醋酸;如果多肽还是不溶,尝试使用纯醋酸和三氟乙酸TFA(<50 μl)来溶解,然后将多肽溶液稀释到需要的浓度。

3. 如果是酸性多肽,先尝试用水溶解;如果用水不能溶解,尝试使用13%氨水来溶解,并将多肽溶液稀释至需要的浓度。如果多肽序列中包含半胱氨酸CysC),不能使用碱性溶液进行溶解。请尝试下面的方法。

4. 中性多肽通常用有机溶剂来溶解。首先,尝试使用乙腈(acetonitrile),或甲醇(methanol)或异丙醇(isopropanol

进行溶解;对于疏水性非常强的多肽,先用少量的二甲基亚砜(DMSO)溶解,并用水稀释到需要的浓度;如果多肽

序列中含有半胱氨酸CysC),使用二甲基甲酰胺(DMF)或N-甲基吡咯烷酮 (NMP)进行溶解。对于容易聚集的多

肽,先加6M的胍盐酸(guanidineHCl)或8M的尿素(Urea)来溶解,然后稀释到需要的浓度。

说明:

1. 为了方便储存及后续使用,建议将多肽溶解至浓度为1-2 mg/ml左右。

2. 普通多肽冻干粉可在-20度保存一年以上,对于已溶解的多肽,建议分装后储存于-20℃;如多肽序列中含有甲硫氨酸MetM),半胱氨酸CysC)或酪氨酸TyrY),建议保存于无氧环境防止氧化 。

 

     冻干多肽的溶解

  1. 多肽溶解中的主要问题是二级结构的形成。

虽然疏水肽链二级结构的形成更明显,但除了最短的肽链外,该现象发生在几乎所有肽链,与极性无关。因此,溶解多肽的第一个原则是用无菌的蒸馏水或去离子水(如果条件允许则用无氧水)

 

3. 若多肽中包含多个碱性氨基酸,使用(1-10%)的乙酸水溶液;对于疏水性非常强的多肽,则使用50%乙酸。

  4. 若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基吗啡或重碳酸盐等挥发性的碱性缓冲液溶解。pH值在层析前必须调整。

  5. 异丙醇和乙腈能溶解中等大小的肽。若肽要上柱,有机溶剂的量则必须很少,否则将严重影响停留时间。

  6. 若多肽因为含有ValLeuMetPheTyrAla等芳烃侧链而高度疏水,或为中性肽时, DMFDMSO等膜变性剂的使用,有助于多肽的溶解。

  a. 高浓度膜变性剂通过破坏多肽的二级结构而助溶。

  b. 膜变性剂适于多肽分析液的制备, 但可能会对其生物活性的研究工作造成干扰。

  c. DMF是最佳变性剂(最高浓度可达30%), 滴加至多肽溶解。

  d. 反相层析时, DMF将与洗脱液前峰一起流出, 依注入量的多少, 峰值可能很高。大多数肽能在大量DMF 流出后几分钟内流出, 若肽链很小, 洗脱太早, 多肽的量将降低。

 对于一些难溶解于双蒸水或缓冲液的肽常用稀乙酸(30%-50%)或稀氨水(30%左右)分别对于碱性(含Arg , Lys , His)或酸性(含Asp, Glu)多肽的溶解。这些方法不溶的多肽, 需要用少量DMFDMSO溶解,然后加入适量缓冲液,这些溶剂可能对某些实验有副作用,所以在实验时要加注意。

注:肽链中含有残基Ala,Cys,Ile,Leu,Met,Phe,Gln,AsnVal将会增加多肽的溶解难度。

 

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